Сегодня выходит на первый план грамотный, научно-обоснованный подход к
племенному разведению собак. Высокая племенная ценность, уникальность
некоторых особей является предпосылкой к тщательному обследованию
репродуктивного аппарата собак не только с целью исключения
инфекционных заболеваний, но и для выявления сроков овуляции. Особенно
актуально такое обследование для животных, выезжающих на вязку в другие
регионы страны и мира. Многие заводчики понимают необходимость
диагностики эструса, однако, дефицит информации, разрозненность данных
по этому вопросу, а также недостаток специалистов в ряде случаев
приводит к получению недостоверных данных или их неправильной
интерпретации. Таким образом, наличие большого спроса на диагностику
полового цикла у сук явилось причиной разработки алгоритма его
исследования с выведением нормативных показателей и определением
параметров овуляции.
Прежде
всего, необходимо дать краткую характеристику полового цикла сук.
Собака является моноцикличным животным, периодичность цикла составляет
от 4 до 12 месяцев. Выделяют следующие стадии: проэструс, эструс,
метэструс и анэструс. Начало течки, или проэтрус, проявляется
соответствующими изменениями в половом аппарате: отмечается рост
фолликулов и увеличение в них количества рецепторов к ФСГ. Клинически
эта стадия характеризуется гиперемией слизистой влагалища, отёчностью
вульвы, появлением кровянистых выделений. Под влиянием фоллитропина
совместно с различными факторами роста происходит стимуляция развития
примордиальных фолликулов, а также дифференцировка и пролиферация
клеток гранулёзы. Из множества начинающих рост фолликулов созревают
лишь единицы. Стадия эструса соответствует половой охоте и овуляции, и
именно в этот период следует проводить вязку. Чёткую границу между
стадиями уловить трудно, однако во время эструса наблюдается
размягчение вульвы, изменение характера вагинальных выделений,
готовность животного к спариванию. Затем на месте лопнувшего фолликула
образуется полость, которая быстро заполняется гранулёзными клетками,
наполненными жёлтым пигментом лютеином. Развитие жёлтого тела
происходит в стадию метэструса, не зависимо от того произошло
оплодотворение или нет. Как известно, беременность у собак имеет
продолжительность 58-65 суток, и после её разрешения начинается стадия
анэструса, или полового покоя.
Становится понятным, что
подготовка к овуляции протекает под воздействием комплекса факторов,
важнейшую роль из которых играют гормоны. Известно, что эстрогены и
гестагены регулируют пролиферативные процессы в слизистой оболочке
влагалища, которая состоит из многослойного плоского эпителия. В
зависимости от степени зрелости, вагинальный эпителий может быть
представлен парабазальными, промежуточными, поверхностно-промежуточными
и поверхностными клетками. Морфологически они различаются следующим
образом: парабазальные клетки самые мелкие, округлой формы, большую
часть клетки занимает ядро. Промежуточные приблизительно вдвое крупнее
за счёт цитоплазмы, поверхностно-промежуточные клетки истончаются,
приобретают несколько угловатую форму. Поверхностные клетки самые
крупные, часто безъядерные, содержащие гранулы кератогиалина В фазе
анэструса вагинальный эпителий тонкий и бледный, в основном представлен
парабазальными клетками. Овуляторный пик характеризуется наибольшей
степенью зрелости вагинального эпителия, т.е. выявлением в вагинальном
мазке более 90 % поверхностных клеток с наивысшим процентом
кариопикноза (более 80%) и большой восприимчивостью к красителю.
Развитие жёлтого тела приводит к появлению в мазке большого количества
роговых чешуек, лейкоцитов и промежуточных клеток.
В нашем исследовании мы поставили следующие задачи:
•
выявить динамику изменения эстрадиола и прогестерона в период
проэструса и эструса и сопоставить её с результатами цитологического
исследования вагинальных мазков
• подвергнуть анализу данные о
сроках вязки и оплодотворяемости в связи с эндокринным статусом и
степенью зрелости вагинального эпителия с целью определения оптимальных
параметров для спаривания
Исследованию подверглись 22 собаки в
возрасте от 1,5 до 7 лет в различные периоды проэструса и эструса.
Концентрация прогестерона и эстрадиола в сыворотке крови определялась
иммуноферментным методом с использованием анализатора вертикального
сканирования и специальных диагностических наборов на базе
клинико-биохимической лаборатории СПбГАВМ. Взятие мазков осуществлялось
стерильными ватными палочками с бокового свода влагалища, препараты
фиксировались специальным красителем Май-Грюнвальда и докрашивались
красителем Романовского-Гимза. В мазках высчитывалось процентное
соотношение парабазальных, промежуточных, поверхностно-промежуточных и
поверхностных клеток из 100 штук.
Анализируя полученные
результаты, мы выявили общую закономерность изменения динамики гормонов
для всех исследованных животных и выделили следующие фазы проэструса:
1.
Фаза относительного покоя. Продолжается от начала пустовки в течение
5-15 суток. Не смотря на выраженные изменения состояния наружных
половых органов, уровень прогестерона и эстрадиола находится на
относительно низком уровне, не превышая нормативные значения
соответствующие стадии анэструса Считается, что в этот период
происходит стимуляция развития примордиальных фолликулов, пролиферация
клеток гранулёзы под воздействием ФСГ.
2. Фаза начала роста
эстрадиола. В течение 2 — 3 суток после первой фазы обнаруживается
некоторое повышение концентрации эстрадиола. В этот период фолликулы
продолжают созревать и синтезируют достаточное количество эстрогенов,
которые, в свою очередь стимулируют выброс лютенизирующего гормона.
3.
Фаза начала роста прогестерона.. Под воздействием лютеотропина
стероидогенез в фолликулах переключается на выработку прогестерона. В
дальнейшем рост прогестерона будет продолжаться, минуя овуляцию, вплоть
до стадии метэструса. Однако, выделяется ещё одна фаза:
4. Фаза пика
эстрадиола. Продолжительность этой фазы 1 — 3 суток. Резкий выброс
эстрогенов обусловлен гибелью большого числа фолликулов, не достигших
окончательной зрелости с высвобождением большого количества
фолликулярной жидкости. Пиковые концентрации эстрадиола, определяемые в
крови, приводят к мощному выбросу гонадолиберина гипоталамусом, а
следовательно - и к секреции гонадотропных гормонов, в наибольшей
степени ЛГ. Предовуляторный выброс лютеотропина способствует
дальнейшему росту уровня прогестерона. Последний вместе с ФСГ и ЛГ
индуцирует синтез протеолитических ферментов в яичниках, а комплекс
факторов (натрийуретический пептид, ангиотензин II, пролактин,
нейропептид У, вазопрессин, брадикинин) увеличивают гидростатическое
давление в фолликулярной полости.
Таким образом, под
воздействием вышеперечисленных причин фолликулярная стенка разрывается
и происходит овуляция. По данным различных исследователей, овуляции
соответствует концентрация прогестерона в пределах 35 - 55 нмоль/л. В
наших исследованиях мы выявили при повышении прогестерона до 32 - 43
нмоль/л довольно резкое падение уровня эстрадиола.
Результаты исследований представлены в таблице.
ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ПРОГЕСТЕРОНА И ЭСТРАДИОЛА В СТАДИЯХ ПРОЭСТРУСА И ЭСТРУСА У СУК
|
Стадии полового цикла
|
Проэструс
|
Эструс
|
|
1 фаза
|
2 фаза
|
3 фаза
|
4 фаза
|
|
|
Продолжительность, сутки
|
11,2+0,87
|
2,4±0,14
|
2,6±0,17
|
2,2±0,1119
|
3,2±0,16
|
|
Концентрация прогестерона, нмоль/л
|
1,36+0,08
|
1,89±0,11
|
6,76±0,19
|
20,47±1.43
|
39,54+1,72
|
|
Концентрация
|
|
|
|
|
|
|
эстрадиола, пмоль/л
|
230,56±8,4
|
478,32+18,6
|
583,24+12,3
|
1169,07+71,4
|
634,93+32,8
|
Необходимо отметить наличие чёткой взаимосвязи между
гормональным статусом в конкретный период пустовки и цитологической
картиной вагинальных мазков. Так, мазки, взятые в 1 фазу проэструса,
характеризовались большим количеством эритроцитов, эпителий был
представлен приемущественно парабазальными клетками (67,4+4,3%) и
промежуточными (30,5+2,8%). Поверхностно-промежуточные клетки
встречались редко (3,1+0,4 %). Во второй фазе соотношение клеток
несколько менялось: увеличивалось содержание промежуточных до 47,3+3,7
% и поверхностно-промежуточных до 15,6±2,1 % на фоне снижения процента
парабазальных - до 37,1+1,2 %. Дальнейшая эстрогенизация приводит к
пролиферации влагалищного эпителия, о чём свидетельствует изменение
цитологического профиля на 3 стадии проэструса в сторону повышения
процента поверхностно-промежуточных клеток (32,4±2,0 %) и появления
единичных поверхностных (4,1+0,32%). Доля промежуточных клеток
уменьшалась до 42,0+2,6 % , а парабазальных - до 21,5+1,8 %. Довольно
резкие цитологические изменения происходили в 4 фазе - пиковые
концентрации эстрадиола приводили к значительному увеличению самых
зрелых клеток. Процентное содержание поверхностных эпителиальных клеток
составляло в этот период порядка 76,3+4,9 %, многие из которых были
безъядерные, Доля поверхностно-промежуточных и промежуточных была
20,4±1,6 % и 3,3+0,3 % соответственно. Следует указать, что многие
клетки изменяли восприимчивость к красителю, становясь зозинофильными.
И, наконец, во время эструса почти все клетки вагинального эпителия в
мазке были поверхностные (91,3+ 3,2%), в большей части из них ядро
отсутствовало. И лишь 8,7+0,34 % составляли поверхностно-промежуточные
клетки.
Мы провели обследование 17 сук для выявления
оптимального дня вязки. Предварительно исключали наличие скрытых
инфекций методом ПЦР-диагностики. У каждой особи во время пустовки
проводилось определение уровня прогестерона и эстрадиола, а также
цитологическое исследование вагинальных мазков. Мы рекомендовали
планировать вязку при уровне прогестерона 30-35 нмоль/л и повторно
через 48 часов. Процент оплодотворяемости составил 100%.
Концентрация
прогестерона является ключевым критерием для определения сроков
овуляции, но определение уровня эстрадиола и цитологическое
исследование влагалищных мазков вносят ценные уточняющие данные. При
первичном обращении во время пустовки рекомендуем делать первый анализ
на 3—5 сутки проэструса. При низких концентрациях половых гормонов и
отсутствии пролиферативных изменений вагинального эпителия повторное
взятие анализов следует проводить через 3-4 суток. Необходимо отметить,
что при начале роста прогестерона можно прогнозировать динамику его
изменения, сделав как минимум, два исследования с интервалом 48 часов.
По данным наших исследований в среднем уровень этого гормона в крови за
сутки увеличивается на 6,52 нмоль/л, однако следует придерживаться
индивидуальных графиков. Рекомендуем использовать полученные нами
данные для практической работы ветеринарных специалистов и кинологов.
Васильева С.В., Васильев Р.М.
Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины
Content-Disposition: form-data; name="file1"; filename=""
Content-Type: application/octet-stream
|
